Présentation

Article

1 - PROTÉINES RECOMBINANTES ET CELLULES D'INSECTE

  • 1.1 - Systèmes de production en cultures cellulaires
  • 1.2 - Systèmes de production dans les larves

2 - SYSTÈME BACULOVIRUS/ CELLULES D'INSECTE

  • 2.1 - Description du système de production
  • 2.2 - Vecteur baculovirus
  • 2.3 - Lignées cellulaires utilisées en production
  • 2.4 - Milieux de culture

3 - FORCES ET FAIBLESSES DU SYSTÈME BACULOVIRUS / CELLULES D'INSECTE

  • 3.1 - Niveaux de production
  • 3.2 - Maturations co- et post-traductionnelles
  • 3.3 - Expressions multiples de gènes
  • 3.4 - Procédés de production
  • 3.5 - Biosécurité et réglementation

4 - PRODUCTION EN CELLULES D'INSECTE ET DÉVELOPPEMENTS INDUSTRIELS

  • 4.1 - Banques cellulaires
  • 4.2 - Banques virales
  • 4.3 - Procédés de production

5 - APPLICATION POUR LA SANTÉ DES PROTÉINES PRODUITES DANS LES CELLULES D'INSECTE

  • 5.1 - Vaccins vétérinaires
  • 5.2 - Vaccins humains
  • 5.3 - Vaccins en développement clinique
  • 5.4 - Évolution des recherches pour le développement de nouveaux vaccins

6 - DÉVELOPPEMENTS TECHNOLOGIQUES POUR DE NOUVELLES APPLICATIONS

  • 6.1 - Protéines thérapeutiques et anticorps
  • 6.2 - Utilisation du baculovirus pour la thérapie génique

7 - CONCLUSION

8 - GLOSSAIRE – DÉFINITIONS

Article de référence | Réf : BIO6810 v1

Production en cellules d'insecte et développements industriels
Production de protéines thérapeutiques dans les cellules d'insecte

Auteur(s) : Hassan CHAABIHI

Date de publication : 10 mai 2015

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Sommaire

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RÉSUMÉ

Les cellules d’insectes sont largement utilisées pour produire des protéines recombinantes matures et actives. Associées aux vecteurs baculovirus, elles sont particulièrement adaptées pour la production de vaccins recombinants, pour des applications vétérinaires ou chez l’homme. En raison de la nature binaire de ce système, le développement de procédés de production nécessite l’intégration et un réglage fin de paramètres liés d’une part au virus et, d’autre part, aux cellules.

Cet article présente les différents modules qui composent le système de production basé sur les cellules d’insecte et le baculovirus. Les faiblesses identifiées ainsi que les axes majeurs de développement de cette technologie sont également décrits.

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ABSTRACT

Therapeutic proteins production in insect cells

Insect cells are widely used to produce mature and active recombinant proteins. Associated with baculovirus vectors, they are particularly suitable for the production of recombinant vaccines for veterinary applications or humans. Due to the binary nature of this system, the development of production processes requires the integration and a fine adjustment of parameters relating firstly to the virus, and secondly to the cells.

This article presents the different modules that make up the production system based on insect cells and baculovirus. The weaknesses identified and the major development-axes of this technology are also described.

Auteur(s)

INTRODUCTION

La recherche biopharmaceutique moderne et le développement de nouvelles solutions thérapeutiques s'appuient le plus souvent sur l'étude des gènes et des protéines pour lesquelles ils codent. L'avènement de technologies de séquençage de génomes entiers à haut débit et la disponibilité de la puissance de calcul nécessaire à l'exploitation des données générées ont considérablement renforcé le rôle du génie génétique et de la biologie moléculaire. C'est ainsi que les mécanismes fondamentaux de la vie – que sont la transcription de l'ADN, puis la traduction des ARN messagers – sont exploités dans une large panoplie de systèmes vivants pour synthétiser des protéines qui seront utilisées dans les programmes de développement pharmaceutique.

Que ce soit pour réaliser des tests de criblage in vitro de molécules chimiques, pour construire des modèles cellulaires exprimant tel ou tel récepteur, développer un anticorps monoclonal thérapeutique ou encore un vaccin recombinant, le recours à un système de production de protéines recombinantes est le plus souvent la règle.

Parmi ces systèmes, les cellules d'insecte occupent une place intermédiaire entre les bactéries (procaryotes) puis les eucaryotes unicellulaires (levures), d'une part, et, d'autre part, les cellules de mammifères supérieurs telles que les CHO (Chineese Hamster Ovary cells). La bactérie Escherichia coli a été le premier système de production développé pour la production d'une protéine thérapeutique, l'insuline humaine. Cet organisme, par sa simplicité d'utilisation, sa rapidité, ses rendements de production et son faible coût, est très souvent évalué en première intention. Cependant, l'absence de modifications protéiques post-traductionnelles importantes, comme les glycosylations, les maturations protéolytiques ou la formation de certains ponts disulfure, rend assez souvent indispensable le recours à des systèmes eucaryotes, et plus particulièrement quand l'ingénierie génétique ne permet pas de lever les obstacles.

À l'autre bout de la chaîne, les cellules de mammifères (CHO principalement) sont aujourd'hui le système de choix pour produire les protéines thérapeutiques complexes. Les anticorps monoclonaux, dont une trentaine sont approuvés et mis sur le marché, sont l'exemple par excellence de protéines multimériques complexes produites dans ces cellules.

Les cellules d'insecte sont très largement utilisées pour produire des protéines pour la recherche biopharmaceutique. Elles s'imposent comme une alternative très intéressante pour accomplir les modifications co- et post-traductionnelles complexes requises pour un grand nombre de protéines, notamment humaines. Grâce au vecteur baculovirus, elles sont rapides à mettre en œuvre et permettent le plus souvent d'obtenir des rendements de production importants (de 100 mg à 1 g/L). Ce système d'expression présente par ailleurs une sécurité biologique accrue. Les éléments qui y sont mis en œuvre ne présentent aucun risque pathogène ni pour les vertébrés ni pour les plantes.

Malgré quelques inconvénients qui freinent encore son développement à grande échelle pour la bioproduction pharmaceutique, le système baculovirus/cellules d'insecte semble avoir trouvé dans les vaccins un premier domaine de prédilection. En effet, plusieurs vaccins, humains ou vétérinaires, produits par ce système sont sur le marché. Des procédures robustes de culture et de fermentation des cellules d'insecte existent. Les développements au niveau des outils biologiques, des procédés et des équipements sont continus, ce qui va certainement lui assurer une part de plus en plus importante en bioproduction. Dans les domaines des vaccins en particulier, le champ est immense car un grand nombre de virus ou d'autres micro-organismes pathogènes ne disposent pas encore de solutions vaccinales satisfaisantes. Par ailleurs, la mobilité grandissante à l'échelle mondiale favorise la dissémination de pathogènes et augmente les risques épidémiques. La rapidité avec laquelle certains vaccins spécifiques peuvent être produits par ce système (8 à 10 semaines pour les virus influenza, par exemple) est un atout majeur.

En parallèle de sa rapide progression dans le domaine des vaccins, le baculovirus et les cellules d'insecte connaissent un développement important dans le domaine du transfert de gènes et de la thérapie génique. Le potentiel du vecteur baculovirus dans ce cadre est parfaitement validé sur plusieurs modèles animaux. Par ailleurs, son exploitation en tandem avec les cellules d'insecte pour produire des particules du virus adéno-associé (AAV) parfaitement aptes à la transgénèse lui ouvre de nouvelles perspectives dans la production pharmaceutique.

L'objectif du présent article est de fournir une vue large de la principale technologie de production de protéines dans les cellules d'insecte, tout en illustrant son positionnement de plus en plus fort dans le domaine des vaccins recombinants. D'un point de vue technique, les méthodes de construction de vecteurs et de culture des cellules sont décrites. Les paramètres qui permettent la mise en place et l'optimisation de procédés de bioproduction sont définis. Enfin, des axes importants de développements scientifiques et technologiques sont mis en perspective afin de souligner le potentiel de ce système.

Nota

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KEYWORDS

Baculovirus   |   insect cells   |   cell culture   |   Recombinant proteins

DOI (Digital Object Identifier)

https://doi.org/10.51257/a-v1-bio6810


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4. Production en cellules d'insecte et développements industriels

Les protéines recombinantes produites dans les cellules d'insecte sont générées lors d'une infection virale ; leur quantité et qualité ainsi que la fiabilité et la reproductibilité du procédé de production sont toutes dépendantes de l'interaction entre le virus et la cellule hôte. Cette interaction dépend à la fois des caractéristiques génétiques du virus, mais également des paramètres physiologiques spécifiques à la cellule. Pour la mise en place de procédés de production robustes et fiables, répondant aux standards de qualité et aux contraintes réglementaires, il est essentiel de définir de la manière la plus fine possible les paramètres impliqués dans l'interaction virus-cellule.

4.1 Banques cellulaires

L'objectif premier d'une banque cellulaire est de disposer de suffisamment d'échantillons pour initier les cultures tout au long de la vie d'un produit. Les banques doivent être préparées à partir de cultures authentiques, constituées d'une population cellulaire uniforme dont l'historique est le plus documenté possible. Leur qualité doit être garantie par des contrôles de stérilité, d'absence de mycoplasmes et spiroplasmes, de niveau de viabilité et de sécurité biologique (endotoxines, tumorigénicité). L'inoculum cellulaire de départ doit avoir un nombre de passages le plus faible possible, ne dépassant pas 40 ou 50 idéalement. Les cellules ayant un nombre de passages faible ont des tailles plus petites et peuvent produire jusqu'à 20 fois plus de protéines que les cellules ayant un nombre de passages élevé (supérieur à 100).

Les cellules sont amplifiées dans un volume suffisant jusqu'à atteindre leur phase exponentielle de croissance. Elle sont réparties dans des ampoules de congélation en présence notamment de DMSO, puis mises en congélation en suivant des paliers de températures négatives jusqu'à la conservation finale dans l'azote liquide. En général, les suspensions cellulaires sont congelées à une densité de 1 × 107 cellules/mL. Les conditions de conservation des banques cellulaires, leur sécurisation et leur suivi dans le temps sont particulièrement importants.

La qualification des banques cellulaires utilisées pour la bioproduction comporte des tests typiques tels que :

  • des tests de stress, pour déclencher...

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BIBLIOGRAPHIE

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  • (2) - AIRENNE (K.J.), HU (Y.C.), KOST (T.A.), SMITH (R.H.), KOTIN (R.M.), ONO (C.), MATSUURA (Y.), WANG (S.), YLÄ-HERTTUALA (S.) -   Baculovirus : an insect-derived vector for diverse gene transfer applications.  -  Mol. Ther., 21, p. 739-749 (2013).

  • (3) - AIRENNE (K.J.), MAKKONEN (K.E.), MÄHÖNEN (A.J.), YLÄ-HERTTUALA (S.) -   In vivo application and tracking of baculovirus.  -  Curr. Gene. Ther., 10, p. 187-194 (2010).

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  • ...

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