Spectrométrie et spectrophotométrie sont des méthodes d’analyse grâce auxquelles on parvient à déterminer le taux d’absorbance d’une substance chimique, c’est-à-dire sa capacité d’absorption de la lumière. Pour procéder à un dosage par spectrophotométrie, on utilise un appareil spécial, le spectrophotomètre qui est capable d’évaluer le spectre d'absorbance d’une solution. Le principe de la spectrophotométrie est simple : l'appareil réalise une mesure de l'intensité de la lumière qu’il reçoit, une fois celle-ci passée à travers un récipient transparent (cuvette dont la matière doit être adaptée à la longueur d’onde), contenant la solution à étudier. À partir de l'intensité de la lumière qui est émise (notée I0) et d’après la mesure de l'intensité de la lumière transmise (I), l'appareil calcule l'absorbance (A). La formule algébrique de cette opération est : A = log(I0/I).
On peut complexifier ces données en tenant compte de la loi de Beer-Lambert qui précise que l’absorbance dépend de façon proportionnelle à la concentration d’une solution, dans la mesure où celle-ci est située en deçà de 10-2 mol.l-1. De fait, il devient possible, en mesurant l'absorbance, de calculer la concentration d'une solution et même d’observer la cinétique d'une réaction chimique (une réaction enzymatique). La méthode de spectrophotométrie est très fréquemment utilisée en raison de ses nombreux avantages : elle est facile à mettre en œuvre, elle permet d’étudier des molécules biologiques en solution et de déterminer leur concentration, elle ne nécessite que des mesures simples et elle peut également permettre de tester un ensemble de paramètres annexes, tels que la température, le pH, etc. On utilise en général une spectrophotométrie UV, laquelle permet aussi de mesurer l'absorbance de gaz ou de solides bien que cela soit plus rare que des solutions. Toutefois, l'absorption UV-visible n'est pas un test spécifique pour tout composé, car il peut être perturbé par divers éléments, comme la nature du solvant, le pH de la solution, sa température, la présence d’impuretés…
sur le marché des spectrophotomètres à transformée de Fourier. Les appareils actuels ont un coût relativement... et aux difficultés d’analyse des échantillons de faibles dimensions. L’apparition des premiers spectrophotomètres... des polymères. Spectrométrie infrarouge en mode dispersif Principe Le principe d’un spectrophotomètre... dispersif, selon le type de spectrophotomètre. Le schéma correspondant à ce montage est donné en figure 1...
Les articles de référence permettent d'initier une étude bibliographique, rafraîchir ses connaissances fondamentales, se documenter en début de projet ou valider ses intuitions en cours d'étude.
Technique très présente dans les laboratoires et l’industrie, la spectrophotométrie d’absorption... ’application possibles terminent cet article. L a spectrophotométrie d’absorption dans l’ultraviolet... . La terminologie utilisée dans le domaine de la spectrophotométrie d’absorption moléculaire... , ce qui correspond à l’ultraviolet (190-400 nm) et au visible (400-800 nm). Certains spectrophotomètres couvrent...
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organiques. En effet, les applications de la colorimétrie, de la fluorimétrie et de la spectrophotométrie... de la colorimétrie , de la fluorimétrie et également de la spectrophotométrie ultraviolette en indiquant... 2 ). Spectrophotométrie de la coloration bleue obtenue à 580 nm PESEZ (M.), BARTOS (J... Le ferricyanure ferrique préparé extemporanément, est aisément réduit en bleu de Prusse, la spectrophotométrie...
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Différents guides traitent de méthodes de validation : SH GTA 04, norme NF X 90-210, guide SFSTP ou encore SFBC. L’objectif commun de ces guides reste d’étudier les méthodes pour identifier les facteurs induisant des erreurs sur les résultats et d’aider à les quantifier et les interpréter.
Dans le même objectif, voici une liste de tests supplémentaires à ne surtout pas négliger :
Les fiches pratiques répondent à des besoins opérationnels et accompagnent le professionnel en le guidant étape par étape dans la réalisation d'une action concrète.
Vous êtes dans un laboratoire accrédité, régulièrement audité par le Cofrac. Celui-ci exige que vous participiez à des essais d’aptitude. Pourquoi cette demande ? Pourquoi se référer à la norme ISO 17025 pour la justifier ? À quoi ces essais d’aptitude servent-ils ? Que faire s’il n’en existe pas pour l’analyte que vous dosez ?
La traçabilité des mesurages des laboratoires d’analyse physico-chimiques ou biochimiques est difficile à réaliser et il a fallu trouver des solutions spécifiques, comme l’explique la norme ISO 17025, à savoir :
L’objectif de cette fiche est de décrire les tests d’aptitude qui représentent la principale méthode employée par les laboratoires accrédités pour assurer une certaine forme de traçabilité et satisfaire à la norme ISO 17025.
Les fiches pratiques répondent à des besoins opérationnels et accompagnent le professionnel en le guidant étape par étape dans la réalisation d'une action concrète.
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