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4 - SÉPARATION DE SOLUTÉS MOLÉCULAIRES

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Article de référence | Réf : P1455 v2

Séparation de solutés ionisés
Chromatographie en phase liquide - Théorie et méthodes de séparation

Auteur(s) : Marcel CAUDE, Alain JARDY

Date de publication : 10 oct. 1994

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Auteur(s)

  • Marcel CAUDE : Ingénieur du Conservatoire National des Arts et Métiers (CNAM ) - Docteur ès Sciences - Directeur de Recherche au Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS )

  • Alain JARDY : Ingénieur CNAM - Docteur ès Sciences - Maître de Conférences à l'École Supérieure de Physique et Chimie de Paris

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INTRODUCTION

La chromatographie en phase liquide (CPL) est une méthode de séparation mettant en œuvre différents modes représentés sur la figure 1 (les chromatographies d'exclusion stérique et chirale faisant l'objet d'articles séparés de ce traité).

La chromatographie en phase liquide sur colonnes est devenue un outil analytique performant utilisé dans des domaines variés allant de l'analyse de fluides biologiques à celui des produits pétroliers lourds. Ce développement est dû à la fois à une meilleure compréhension des mécanismes d'interaction - au demeurant de plus en plus diversifiés -, aux grandes efficacités obtenues avec des phases stationnaires de plus en plus fines (3 µm) et enfin aux progrès importants effectués dans le domaine de l'appareillage, en particulier pour la détection.

La CPL se présente ainsi comme une méthode de séparation complémentaire de la chromatographie en phase gazeuse (CPG) pour l'analyse de solutés peu volatils ou thermodégradables (cas de la majorité des molécules thérapeutiques). Elle se distingue de la CPG par la variété des phases stationnaires et partant des interactions mises en jeu et par une température moins élevée, ce qui accroît la force de ces interactions et augmente la sélectivité.

En revanche, la CPL est une méthode de mise en œuvre plus délicate que la CPG ; de plus, malgré les progrès récents, elle souffre encore de l'absence de détecteurs aussi sensibles et universels que la détection à ionisation de flamme de la CPG.

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VERSIONS

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DOI (Digital Object Identifier)

https://doi.org/10.51257/a-v2-p1455


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5. Séparation de solutés ionisés

Les mécanismes de séparation de ces solutés sont fondés essentiellement sur des interactions électrostatiques entre espèces chargées présentes simulatanément dans chacune des deux phases. Rappelons que de nombreux composés organiques sont susceptibles de donner des ions en solution par un controle adéquat du pH.

Ainsi les acides aminés, en fonction du pH, peuvent être présents en solution sous forme moléculaire ou sous la forme d’anions ou de cations.

Considérons, par exemple, le cas de la glycine HOOC–CH2–NH2 dont les pkA sont respectivement 2,3 et 9,8 (le premier correspond à la constante d’acidité du couple –COOH/–COO, le second à la constante du couple –NH3+/–NH2). La figure 26 montre l’évolution de la charge moyenne et la répartition des espèces de la glycine en fonction du pH de la phase aqueuse.

On observe que la glycine se comporte comme un cation pour des valeurs de pH inférieures à 3, comme un anion pour des valeurs de pH supérieures à 9 et comme une espèce non chargées dans la zone de pH intermédiaire où la forme zwitterionique prédomine. Plus généralement, pour un couple HA+/A, la forme ionique prédomine pour des valeurs de au pH inférieures pkA du couple ; on a en effet :

(Si pH = pkA – 1, alors │HA+│ = 10 │A│,

si pH = pkA – 2, │HA+│ = 100 │A│, etc.).

Cet exemple montre que la séparation des acides aminés peut être envisagée soit sous forme non chargée entre pH 4 et 8 (on parle alors de « recul d’ionisation » et on met en œuvre, par exemple, la chromatographie de partage à polarité de phases inversée), soit sous la forme d’espèces ionisées :

  • anioniques (pH > 9),

  • cationiques (pH < 3).

5.1 Chromatographie d'échange d'ions

Les séparations par échange d’ions s’adressent plus particulièrement...

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BIBLIOGRAPHIE

  • (1) - ROSSET (R.), CAUDE (M.), JARDY (A.) -   Chromatographies en phases liquide et supercritique.  -  Masson, Paris, 1991.

  • (2) - BIDLINGMEYER (B.A.), WARREN Jr (F.V.) -   *  -  Anal. Chem., 56, p. 1583 A, 1984.

  • (3) - FOLEY (J.P.), DORSEY (J.G.) -   *  -  Anal. Chem., 55, p. 730, 1983 et J. Chromatogr. Sci., 22, p. 40, 1984.

  • (4) - WILKE (C.R.), CHANG (P.) -   *  -  Am. Inst. Chem. Eng. J., 1, p. 264, 1955.

  • (5) - KATZ (E.D.), SCOTT (R.P.W.) -   *  -  J. Chromatogr. 270, p. 29, 1983.

  • (6) - SASSIAT (P.R.), MOURIER (P.), CAUDE (M.H.), ROSSET (R.H.) -   *  -  Anal. Chem., 59, p. 1164, 1987.

  • (7)...

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