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RÉSUMÉ
L’électrophorèse capillaire (EC), initialement développée pour l’analyse de protéines, a un champ d'applications beaucoup plus étendu pour l'analyse des petites molécules. L’EC est utilisée dans l’industrie pharmaceutique, pour l'analyse chirale, le dosage et la détermination de la pureté des principes actifs, et dans les domaines de l’environnement et de l’agroalimentaire, pour l'analyse d’eaux ou de boissons.
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Myriam TAVERNA : Maître de conférences en chimie analytique Laboratoire de chimie analytique Faculté de pharmacie (Châtenay-Malabry)
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Isabelle LE POTIER : Maître de conférences en chimie analytique Laboratoire de chimie analytique Faculté de pharmacie (Châtenay-Malabry)
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Philippe MORIN : Professeur de chimie analytique - Institut de chimie organique et analytique - Université d’Orléans
INTRODUCTION
L’électrophorèse capillaire (EC) a été initialement développée pour l’analyse de protéines, de manière à proposer une méthode plus rapide et générant moins de déformations de bandes que l’électrophorèse classique. De nombreux problèmes liés à l’adsorption des protéines sur les capillaires de silice et à leur solubilité ont freiné au départ le développement de la technique dans le domaine de l’analyse des protéines et des macromolécules en général. Les progrès réalisés dans ce domaine ont été particulièrement importants. Par ailleurs, le champ d’application de l’EC s’est considérablement étendu, notamment à l’analyse des petites molécules, en mettant en œuvre les nombreux modes de séparation de cette technique. Ainsi, la technique couvre actuellement le domaine de l’analyse des petites molécules, neutres ou chargées, polaires ou apolaires, organiques ou inorganiques et celle des macromolécules biologiques (protéines, ADN, polysaccharides...). L’EC est un outil performant qui trouve notamment sa place aussi bien dans l’industrie pharmaceutique (analyse chirale, dosage et détermination de la pureté des principes actifs...) que dans les domaines de l’environnement et de l’agroalimentaire (analyse d’eaux, de boissons...).
Ce fascicule est le troisième volet de l’étude sur l’électrophorèse capillaire présentée dans ce traité et qui comprend :
Électrophorèse capillaire- Principe : Électrophorèse capillaire. Principe ;
Électrophorèse capillaire- Appareillage : Électrophorèse capillaire. Appareillage ;
[P 3 367] : Électrophorèse capillaire. Applications.
Pour un exposé sur la théorie générale de l’électrophorèse, le lecteur pourra consulter l’article Électrophorèse, référence [27], dans ce traité.
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- Version courante de sept. 2021 par Nathalie DELAUNAY
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4. Oligosaccharides et polysaccharides
4.1 Oligosaccharides
L’ECZ et l’ECG sont les deux modes principalement utilisés pour analyser les oligosaccharides libérés des protéines.
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La séparation en mode ECZ des oligosaccharides de type oligomannose possédant des groupements ionisables faibles (sucres neutres) est généralement effectuée en utilisant un tampon borate. Le principe de la séparation repose sur la complexation des sucres avec le borate pour former des complexes chargés négativement. La séparation peut être également menée en l’absence d’agents complexants en utilisant des conditions de pH extrêmement basiques permettant la déprotonation des sucres. L’analyse par ECZ des oligosaccharides comportant des groupements acides comme, par exemple, les acides sialiques, peut en revanche être menée en utilisant une gamme de pH beaucoup plus large.
En raison du faible coefficient d’absorptivité molaire des carbohydrates, la détection par spectrométrie UV indirecte, réalisée en ajoutant au tampon d’analyse un additif possédant un groupement chromophore tels que le tryptophane, l’acide 1-naphtylacétique ou l’acide sorbique, est souvent préférée à la détection directe. La dérivation des oligosaccharides par un agent chromophore ou fluorophore, dont la liste est présentée dans l’article Électrophorèse capillaire- Appareillage concernant les modes de détection, est une alternative souvent retenue car, dans le cas des sucres neutres, outre le gain en sensibilité, le choix judicieux de l’agent de dérivation peut permettre d’introduire une charge sur le dérivé. Cette stratégie est fréquemment retenue pour établir par ECZ le profil en oligosaccharides d’une glycoprotéine : après hydrolyse chimique ou enzymatique...
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BIBLIOGRAPHIE
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(1) - FRANÇOIS (C.), MORIN (Ph.), DREUX (M.) - Effect of the concentration of 18-crown-6-added to the electrolyte upon the separation of ammonium, alkali and alkali-earth cations by capillary electrophoresis - . J. Chromatogr. A, 706, p. 535-553 (1995).
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(2) - MORIN (Ph.) - Améliorations récentes lors de l’analyse des ions par électrophorèse capillaire - . Analusis, 27, p. 107-120 (1999).
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(3) - CAHOURS (X.), MORIN (Ph.), DREUX (M.) - Quantitative determination of inorganic minor cations in sodium-, calcium- and magnesium-matrix samples by capillary electrophoresis - . J. Chromatogr. A, 810, p. 209-220 (1998).
-
(4) - FRANÇOIS (C.), MORIN (Ph.), DREUX (M.) - Separation of transition metal cations by capillary electrophoresis : optimization of complexing agent concentrations (lactic acid and 18-crown-6) - . J. Chromatogr. A, 717, p. 393-408 (1995).
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(5) - BAUMY (P.), MORIN (Ph.), DREUX (M.), VIAUD (M.), BOYE (S.), GUILLAUMET (G.) - Determination of β-cyclodextrin inclusion complex constants for 3,4-dihydro-2-H-1-benzopyran enantiomers by capillary electrophoresis - ....
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