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Auteur(s)
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Alain LOMBARD : Consultant toxicologue et IPRP, Allotoxconsulting, Antibes, France
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Lire l’articleINTRODUCTION
L’action toxique locale d’une substance chimique peut se traduire par une action néfaste localisée à l’endroit de contact avec l’organisme (voies respiratoires, peau, œil).
Elle est le résultat de contacts accidentels et limités dans le temps à concentrations/doses élevées.
La tolérance locale est un problème d’innocuité à court terme.
Il vous faut comprendre les mécanismes d’irritation et de corrosion respiratoire, cutanée et oculaire afin de savoir choisir les tests qui permettront d’évaluer le danger d’irritation et de corrosion. Vous pourrez ainsi procéder au classement et à l’étiquetage des substances chimiques et mettre en place les moyens de prévention adaptés.
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Comment effectuer le classement et l’étiquetage irritants et corrosifs des substances chimiques ?6. Tests « in vitro » d’irritation ou de corrosion oculaire
Afin de limiter le nombre d’animaux testés et la souffrance animale, des tests « in vitro » sur organes isolés ont été développés.
Essai OCDE no 492B : test sur cornée humaine reconstituée. Le test utilise un épithélium reconstruit semblable à la cornée humaine qui imite étroitement les propriétés histologiques, morphologiques, biochimiques et physiologiques de l’organisme humain. Il est basé sur l’évaluation de la cytotoxicité après l’exposition d’une substance après deux temps d’incubation. La cytotoxicité est exprimée comme une diminution de la conversion mitochondriale de MTT (thiazolyl blue tetrazolium bromide) en un autre composant coloré, le formazan. Le MTT permet de mesurer l’activité métabolique cellulaire, indicatrice de la viabilité, de la prolifération et de la toxicité cellulaires. Les cellules viables contiennent des oxydoréductases NAD(P)H-dépendantes qui réduisent le MTT en formazan.
Ce dosage colorimétrique repose sur la réduction d’un sel de tétrazolium jaune (le bromure de 3-(4,5-diméthylthiazol -2-yl) -2,5-diphényltétrazolium ou MTT) en cristaux de formazan violets par les cellules métaboliquement actives. Les cristaux de formazan insolubles sont dissous avec une solution de solubilisation et la solution colorée résultante est quantifiée par mesure de l’absorbance entre 500 et 600 nm à l’aide d’un spectrophotomètre multipuits. Plus le nombre de cellules métaboliquement actives viables est important, plus la solution est foncée. Une diminution du nombre de cellules viables entraîne une diminution de l’activité métabolique dans la culture testée.
Une substance chimique est classée irritante si 50 % ou moins des cellules sont viables, et non irritant si plus de 50 % des cellules sont viables.
6.1 Essai OCDE n° 437
Méthode d’essai d’opacité et de perméabilité de la cornée bovine pour l’identification de substances corrosives et fortement irritantes pour l’œil .
Les effets corrosifs sur la cornée sont mesurés par :
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la diminution de la capacité de transmission de la lumière (opacité) par l’utilisation d’un opacitomètre basé sur la lumière laser (LLBO) ;
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l’augmentation du passage de la fluorescéine...
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Tests « in vitro » d’irritation ou de corrosion oculaire
ANNEXES
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A. Lombard et al. – Évaluation technico-économique des produits au stade initial du développement. Partie 2, pp. 153-281. ISTE Éditions, Ltd London (2024).
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