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Procédés de culture en masse de cellules animales| Réf : BIO6810 v1
Auteur(s) : Hassan CHAABIHI
Date de publication : 10 mai 2015
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Dans la majorité des cas, le système baculovirus/cellules d'insecte permet de produire des protéines solubles et fonctionnellement actives à des niveaux allant jusqu'à 50 % des protéines cellulaires totales. Cependant, comme avec n'importe quel autre système, les rendements obtenus sont très variables et dépendent fortement de la nature de la protéine, de sa complexité et de sa localisation. Les protéines intracellulaires, naturellement solubles, sont généralement bien produites avec des rendements de plusieurs centaines de mg/L dans les conditions standards de culture (densité à 106 cellules/mL en moyenne). À l'inverse, les protéines et récepteurs membranaires ne sont produits en général que très faiblement (de l'ordre du mg/L).
Pour les protéines sécrétées dans le milieu, les niveaux de production peuvent aussi varier dans des proportions considérables. Certaines peuvent atteindre l'échelle des 100 mg/L, quand d'autres restent à moins de 1 mg/L. Il arrive très fréquemment qu'une protéine abondamment produite ne soit pas sécrétée en totalité. Une large proportion peut en effet rester bloquée sous la forme d'agrégats à l'intérieur de la cellule. Ce phénomène est vraisemblablement dû à une saturation de la voie de sécrétion. Une protéolyse due à des enzymes virales peut parfois être à l'origine de niveaux de production plus faibles, notamment dans les milieux sans sérum. C'est ainsi que l'utilisation de vecteurs viraux délétés de gènes codant pour ce type d'enzymes (gènes de la cathepsine et de la chitinase) peut améliorer les niveaux de production et de sécrétion .
Certaines protéines, dont des...
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(1) - ABE (T.), MATSUURA (Y.) - Host innate immune responses induced by baculovirus in mammals. - Curr. Gene. Ther., 10, p. 226-231 (2010).
(2) - AIRENNE (K.J.), HU (Y.C.), KOST (T.A.), SMITH (R.H.), KOTIN (R.M.), ONO (C.), MATSUURA (Y.), WANG (S.), YLÄ-HERTTUALA (S.) - Baculovirus : an insect-derived vector for diverse gene transfer applications. - Mol. Ther., 21, p. 739-749 (2013).
(3) - AIRENNE (K.J.), MAKKONEN (K.E.), MÄHÖNEN (A.J.), YLÄ-HERTTUALA (S.) - In vivo application and tracking of baculovirus. - Curr. Gene. Ther., 10, p. 187-194 (2010).
(4) - ALNEMRI (E.S.), ROBERTSON (N.M.), FERNANDES (T.F.), CROCE (C.M.), LITWACK (G.) - Overexpressed full-length human BCL2 extends the survival of baculovirus-infected Sf9 insect cells. - Proc. Natl. Acad. Sci., États-unis, 89, p. 7295-7299 (1992).
(5) - AUMILLER (J.J.), HOLLISTER (J.R.), JARVIS (D.L.) - A transgenic lepidopteran insect cell line engineered to produce CMP-sialic acid and sialoglycoproteins. - Glycobiology, 13, p. 497-507 (2003).
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