Microscopie confocale à balayage laser
Microscopies optiques à balayage

2.1 Présentation de la méthode

Contrairement à la microscopie traditionnelle où le champ est uniformément éclairé, en microscopie optique à balayage celui-ci est balayé de manière continue par l’image d’un point lumineux fournie par l’objectif lui-même, donc par un « spot » dont la dimension est du même ordre que la limite de résolution. Le flux lumineux transmis ou réfléchi en chaque point de l’objet, donc à un instant donné, est recueilli par un photorécepteur unique fournissant un signal portant information sur le niveau photométrique au point considéré, alors qu’en microscopie traditionnelle correspond à chaque point du champ un élément photosensible du récepteur (rétine de l’œil, émulsion photographique, tube de télévision, mosaïque CCD), chacun d’eux pouvant être de sensibilité différente à une même excitation, voire de dimensions différentes, donc fournissant une résolution différente, si le récepteur est constitué d’éléments discrets.

La microscopie flying-spot est à l’origine de cette procédure. L’image du spot d’un tube à rayons cathodiques, ou tube analyseur, balayé dans deux directions est projetée dans le champ par le microscope complet (figure 1). L’information sur le facteur de transmission en chaque point de l’objet est véhiculée par le signal photoélectrique fourni par un photorécepteur placé dans la pupille du condenseur. Une image peut alors être affichée en utilisant ce signal pour moduler l’intensité du faisceau d’électrons (Z) d’un tube moniteur à mémoire à entretien d’image dont le balayage est synchrone de celui du tube analyseur. Il est encore possible d’ajouter ce signal, et à l’origine ce fut probablement l’usage le plus fréquent en microscopie flying-spot, au signal de balayage image (Y) du moniteur fonctionnant ainsi en tube oscilloscope et d’afficher, pour chaque ligne, une courbe représentative de ses variations photométriques. Les deux types d’information, par application du signal photoélectrique tant en Z qu’en Y, peuvent également être affichées simultanément. Avec ce mode d’éclairage, mis à part l’énergie résiduelle dans les pieds de la tache de diffraction, rien ne vient...