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Auteur(s)
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Alain LOMBARD : Consultant toxicologue et maîtrise des risques, Allotoxconsulting, Antibes, France
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La sensibilisation à une substance chimique survient après des contacts répétés, à faibles doses, pendant une période plus ou moins longue. Les réactions de sensibilisation (allergie) se déclenchent d’une manière inattendue lors d’un nouveau contact fortuit avec la substance sensibilisante.
Les tests chez l’animal de laboratoire suivent le même schéma : induction – temps de latence – déclenchement, suivis de la cotation des effets.
Il est par ailleurs important de savoir utiliser les tests de sensibilisation et de pouvoir interpréter les résultats des études afin de reconnaître et d’évaluer les potentialités allergisantes d’une substance chimique pour l’être humain.
Les tests officiels de détection du pouvoir sensibilisant d’une substance doivent ainsi être choisis avec soin et leurs résultats sont importants pour le classement de la substance.
Quels sont les tests disponibles et comment les interpréter ?
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- Version archivée 1 de mai 2014 par Alain LOMBARD
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Essai ASTM D6355 : test chez l’humain, standard test method for human repeat insult patch testing (HRIPT)6. Essai OCDE n° 442B : sensibilisation cutanée. Essai de stimulation locale des ganglions lymphatiques (BrdU- ELISA)
L’essai de stimulation locale des ganglions lymphatiques BrdU-ELISA (ELGL : BrdU-ELISA) est une variante non radioactive de la méthode ELGL qui vise à identifier les substances chimiques sensibilisantes et à mesurer la prolifération lymphocytaire qu’ils induisent dans les ganglions lymphatiques auriculaires. Cette méthode décrite chez la souris (de souche CBA/JN) se base sur la quantification de la 5-bromo-2– désoxyuridine (BrdU), un analogue of thymidine, dans l’ADN des lymphocytes, comme indicateur de cette prolifération. Quatre animaux au minimum sont employés par groupe de dose, avec au minimum trois concentrations de la substance d’essai, plus un groupe contrôle négatif traité avec le véhicule seul, et un contrôle positif, au besoin. Le protocole expérimental dure six jours.
Ensuite, les animaux sont euthanasiés et une suspension unicellulaire de cellules de ganglions lymphatiques (CGL) est préparée. La procédure de dispersion des CGL est une étape cruciale, en particulier pour les ganglions lymphocytaires très petits chez les animaux du groupe contrôle négatif. Ensuite la BrdU dans l’ADN des lymphocytes est quantifiée à l’aide d’un kit de dosage ELISA. L’essai inclut des mesures (pesée, BrdU) et des observations cliniques quotidiennes. Les résultats sont exprimés par l’indice de stimulation (IS) obtenu par calcul à partir des indices moyens de marquage BrdU pour les différents groupes. Un SI ≥1.6 justifie l’évaluation de la substance d’essai comme sensibilisant potentiel.
Pour approfondir le suivi de la réponse cutanée locale dans l’essai principal, des paramètres supplémentaires comme la cotation de l’érythème auriculaire, les mesures de l’épaisseur de l’oreille (obtenues à l’aide d’une jauge d’épaisseur ou par pesée d’échantillons d’oreille après nécropsie) peuvent être inclus dans le protocole d’étude.
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Essai OCDE n° 442B : sensibilisation cutanée. Essai de stimulation locale des ganglions lymphatiques (BrdU- ELISA)
ANNEXES
A. Lombard et al. - Évaluation technico-économique des produits au stade initial du développement. Partie 2, pp 153-281, ISTE éditions Ltd London (2024).
HAUT DE PAGE
ECHA (European Chemical Agency)
L’Agence européenne des produits chimiques met en œuvre la législation de l’UE sur les produits chimiques afin de protéger la santé humaine et l’environnement. Les travaux contribuent aussi au bon fonctionnement du marché intérieur, à l’innovation et à la compétitivité de l’industrie chimique européenne. Tout est fabriqué à partir des produits chimiques. L’amélioration de la connaissance des produits dangereux et des réglementations en la matière protège les travailleurs, les consommateurs et l’environnement, facilite le recyclage et encourage l’industrie à mettre au point des solutions de remplacement plus sûres.
L’OCDE propose des lignes directrices pour les essais de produits chimiques sont un ensemble de méthodes d’essai les plus pertinentes agréées internationalement et utilisées par les gouvernements, l’industrie et les laboratoires indépendants pour déterminer l’innocuité des produits chimiques et des préparations, y compris les pesticides et les produits chimiques industriels. Elles couvrent les essais sur les propriétés physico-chimiques des substances, leurs effets sur la santé humaine et leurs effets sur l’environnement ainsi que la dégradation et...
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