Méthode analytique développée par le SCL/Montpellier
Dosage de la morpholine sur les fruits par LC-MS/MS

3.1 Principe

• Extraction de la morpholine en milieu acide.

• Purification sur colonne SPE échangeuse de cations et élution en milieu alcalin.

• L'extrait purifié est dilué et injecté sur colonne HILIC après filtration.

• La détermination s'effectue par LC-MS/MS.

3.2 Réactifs et matériels

• Réactifs :

  • acide chlorhydrique N/10 ;

  • solution ammoniacale 30 % ;

  • méthanol qualité HPLC ;

  • acétonitrile qualité HPLC ;

  • eau Milli-Q (Millipore Co) ;

  • acide formique 99 % ;

  • formate d'ammonium ;

  • morpholine (réf. Dr Ehrenstorfer : C 15330000).

• Matériels :

  • tubes à centrifuger en polypropylène de 50 mL avec capuchons ;

  • colonne d'extraction OASIS MCX 6cc/150 mg (réf. Waters : 186000255) ;

  • manifold pour purification sur colonne SPE ;

  • centrifugeuse de laboratoire pour tubes de 50 mL (ALC, modèle 4232) ;

  • pipettes automatiques de 5 mL et 10 mL ;

  • couplage LC-MS/MS (Biosystems, API 3200 Qtrap).

3.3 Développement de la méthode

• Extraction/centrifugation :

  Dans un tube à centrifuger de 50 mL :

  • peser précisément 10 g d'échantillon préalablement préparé ;

  • ajouter 10 mL d'acide chlorhydrique N/10 et agiter vigoureusement pendant au moins une minute ;

  • centrifuger pendant 5 min à 5 000 tr/min et mettre en volume l'extrait aqueux acide.

• Purification (figure 2) :

  • disposer une cartouche d'extraction OASIS MCX sur le manifold ;

  • conditionner...