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Électrophorèse capillaire - Principe| Réf : P3366 v1
Auteur(s) : Myriam TAVERNA, Isabelle LE POTIER, Philippe MORIN
Date de publication : 10 déc. 2003
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Les détecteurs utilisés en électrophorèse capillaire doivent répondre à plusieurs exigences, la plus importante étant la haute sensibilité indispensable pour détecter les faibles quantités d’échantillons analysés en électrophorèse capillaire. Pour minimiser l’élargissement de bandes, les volumes d’échantillon injectés doivent rester inférieurs à 2 % du volume total du capillaire, qui est de l’ordre de 1 à 5 µL pour un capillaire de dimension classique 50 cm × 50 µm. Les détecteurs doivent également être conçus de manière soit à permettre la détection directement à partir du capillaire dont une très faible section va servir de cellule de détection, soit à s’adapter « off-column » en maintenant, grâce à des connexions ou interfaces appropriées, la configuration capillaire nécessaire à l’écoulement des flux. Les modes de détection commercialisés sont les spectrométries UV/visible à longueur d’onde fixe ou variable, à barrettes de diodes, la fluorescence laser, la spectrométrie de masse. Les méthodes de détection indirecte sont également exploitées. De façon moins fréquente ont été mentionnées dans la littérature la détection ampérométrique, conductimétrique et radiométrique.
Si les concentrations minimales détectables en EC sont souvent plus élevées qu’en CPL, les quantités minimales détectables sont plus faibles, permettant ainsi d’analyser des échantillons disponibles uniquement en faible quantité.
Tous les appareils commercialisés possèdent ce mode de détection. En général, la détection des composés a lieu à travers le capillaire lui-même, près de l’extrémité de sortie. Le capillaire sert ainsi de cellule de détection cylindrique dont le trajet optique est environ égal à 60 % du diamètre du capillaire. La couche de polyimide recouvrant le capillaire, opaque aux rayons UV, est éliminée par combustion sur une longueur de 1 cm, à quelques centimètres de l’extrémité de sortie. Plusieurs catégories de lampes UV peuvent être employées :
lampes ayant une bande passante étroite...
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(1) - COUDERC (F.), CAUSSE (E.), BAYLE (C.) - Drug analysis by capillary electrophoresis and laser induced fluorescence - . Electrophoresis 19, p. 2777-2790 (1998).
(2) - CAHOURS (X.), DESSANS (H.), MORIN (P.), DREUX (M.), AGROFOGLIO (L.) - Determination at ppb level of an anti-human immunodeficiency virus nucleoside drug by capillary electrophoresis-electrospray ionization tandem mass spectrometry - . J. Chromatogr. A 895, p. 101-109 (2000).
(3) - BREADMORE (M.C.) , HADDAD (P.R.) - Approches to enhancing the sensitivity of capillary electrophoresis methods for the determination of inorganic and small organic anions. - Electrophoresis 22 (12) p. 2464- 2489 (2001).
(4) - GAREIL (P.), PELTRE (G.) - Électrophorèse - . Électrophorèse
(5) - MONÉGIER (B.) - Électrospray - . Électrospray (1997).
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