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RÉSUMÉ
L’autoradiographie permet d'étudier l’exacte localisation d’une substance radiomarquée dans un tissu à des niveaux cellulaire et subcellulaire avec la conservation de l’architecture tissulaire. Cet article présente les différentes techniques d'autoradiographie : sur film et micro-autoradiographie. Une deuxième partie est consacrée au traitement des artefacts, qu'ils soient liés aux conditions expérimentales, à la préparation des tissus, ou à l'évaluation quantitative.
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Lire l’articleAuteur(s)
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François BOURREL : Docteur en pharmacie - Diplômé de l’Institut national des sciences et techniques nucléaires - du Commissariat à l’énergie atomique (INSTN-CEA) - Attaché des Hôpitaux de Toulouse
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Philippe COURRIÈRE : Professeur de biophysique, UFR de pharmacie, Toulouse - Biologiste des centres de luttes contre le cancer
INTRODUCTION
L’autoradiographie est une technique de grande qualité pour étudier l’exacte localisation d’une substance radiomarquée dans un tissu à des niveaux cellulaire et subcellulaire avec la conservation de l’architecture tissulaire. De plus, des quantifications absolues ou relatives de la substance marquée peuvent être obtenues. Cependant, l’autoradiographie est aussi quelquefois une technique d’interprétation compliquée et l’association de techniques immunohistochimiques et fluorométrique peuvent palier ces problèmes. Les principales améliorations portées à l’autoradiographie consistent à réduire l’acquisition du signal radioactif par l’utilisation d’imageurs permettant des gains de temps considérables et une analyse de l’image.
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5. Autoradiographie quantitative
Pour une meilleure étude de la fonctionnalité d'un processus métabolique, il n'est pas seulement nécessaire d'étudier la localisation du processus, mais également de mesurer son intensité à partir de l'accumulation de la radioactivité dans une zone d'intérêt qui peut s'étendre du corps entier jusqu'au niveau subcellulaire.
Dans le cas d'une quantification corps entier, l'évaluation de la distribution du composé marqué et de ses métabolites est réalisée classiquement par deux techniques, soit en sacrifiant des animaux à différents temps, puis en pesant les différents organes et en comptant leur radioactivité (Bq.g–1), soit par imagerie scintigraphie à l'aide d'une gamma caméra à positons (TEP). Ces deux techniques souffrent principalement du manque de résolution spatiale et des problèmes liés au type d'émission radioactive :
-
émission bêta : nécessité de dissoudre les tissus, scintigraphie impossible ;
-
émission gamma : comptage direct et scintigraphie possible.
L'autoradiographie permet de quantifier la distribution radioactive à partir de l'augmentation de la densité optique du film [33]. L'établissement d'une relation entre la concentration du traceur et la densité optique nécessite l'utilisation d'une gamme étalon de radio-isotopes dit « tissus équivalents » puisque l'isotope est pris au piège dans une matrice de densité équivalente au tissu étudié (carboxyméthyl cellulose, foie de poulet, méthacrylate de gélatine, polyglycol, agarose). Ces étalons sont coupés à la même épaisseur que celle des coupes tissulaires. Les standards sont exposés sur le film avec les mêmes conditions que les coupes tissulaires (figure 3).
5.1 Méthode générale
Les étapes de la méthode sont les suivantes :
-
la substance radiomarquée est administrée à l'animal ;
-
les animaux sont sacrifiés à des intervalles de temps spécifiques ;
-
l'animal entier ou les organes sont congelés dans un mélange d'hexane/carboglace ou dans l'azote liquide ;
-
les animaux ou les organes sont coulés dans un bain de carboxyméthyl cellulose ;
-
les animaux ou les organes sont tranchés à l'aide d'un microtome à – 20 C (30 µm)...
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BIBLIOGRAPHIE
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(2) - FOOS (J.) - Manuel de radioactivité à l'usage des utilisateurs - . 197 p., Ed. Formascience, Orsay, 1993.
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(3) - COURRIÈRE (Ph) - Biophysique sensorielle ; Biophysique de la matière ; Physique nucléaire - . Tome II. Masson, Paris, 1990.
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(5) - WOOD (W.G.), WACHTER (C.), SCRIBA (P.C.) - Experiences using chloramine-T and 1, 3, 4, 6-tetrachloro-3 alpha, 6 alpha-diphenylglycoluril (Iodogen) for radioiodination of materials for radioimmunoassay (Techniques utilisant la chloramine T et l'iodogen pour la radioiodation de molécules destinées au radioimmunodosage) - . J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 10, 19, p.1051-6, 1981.
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DANS NOS BASES DOCUMENTAIRES
ANNEXES
Livres et revues
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Revue de l'ACOMEN - Spécial radioimmunologie : intérêt clinique, méthodologie, économique - . 172 p. 2, Éditions de l'ACOMEN, Paris, 1995.
Revue de l'ACOMEN - Rencontre ACOMEN de radioanalyse de Vars. Mars. 1998 - . 275 p. 3, Éditions de l'ACOMEN, Paris, 1998.
INGRAND (J.) - Numéro centré sur la R.I.A - . J. Med. Nucl. Biophy. 1, 15, p.1-113, 1991.
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