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RÉSUMÉ
L’autoradiographie permet d'étudier l’exacte localisation d’une substance radiomarquée dans un tissu à des niveaux cellulaire et subcellulaire avec la conservation de l’architecture tissulaire. Cet article présente les différentes techniques d'autoradiographie : sur film et micro-autoradiographie. Une deuxième partie est consacrée au traitement des artefacts, qu'ils soient liés aux conditions expérimentales, à la préparation des tissus, ou à l'évaluation quantitative.
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Lire l’articleAuteur(s)
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François BOURREL : Docteur en pharmacie - Diplômé de l’Institut national des sciences et techniques nucléaires - du Commissariat à l’énergie atomique (INSTN-CEA) - Attaché des Hôpitaux de Toulouse
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Philippe COURRIÈRE : Professeur de biophysique, UFR de pharmacie, Toulouse - Biologiste des centres de luttes contre le cancer
INTRODUCTION
L’autoradiographie est une technique de grande qualité pour étudier l’exacte localisation d’une substance radiomarquée dans un tissu à des niveaux cellulaire et subcellulaire avec la conservation de l’architecture tissulaire. De plus, des quantifications absolues ou relatives de la substance marquée peuvent être obtenues. Cependant, l’autoradiographie est aussi quelquefois une technique d’interprétation compliquée et l’association de techniques immunohistochimiques et fluorométrique peuvent palier ces problèmes. Les principales améliorations portées à l’autoradiographie consistent à réduire l’acquisition du signal radioactif par l’utilisation d’imageurs permettant des gains de temps considérables et une analyse de l’image.
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4. Artefacts liés aux conditions expérimentales et à la préparation des tissus
4.1 Anomalie de distribution du composé radiomarqué
Des taux faibles de fixation et une biodistribution limitée du composé radiomarqué peuvent être une source d’images faussement négatives. Ce problème peut résulter d’un mauvais passage des barrières, d’un mauvais débit sanguin, d’une altération des transports membranaires actif ou passif (diffusion) par altération des membranes.
HAUT DE PAGE4.2 Fuite et redistribution du composé radiomarqué et de constituants tissulaires
Des composés radiomarqués non liés de façon covalente et des constituants tissulaires qui ne sont pas immobilisés par des fixateurs peuvent être perdus et redistribués pendant la phase de préparation du tissu. De cette façon, à la fois des résultats faux négatifs et faux positifs peuvent apparaître sur l’autoradiographie. Fuite et redistribution constituent une source fréquente d’artefacts en autoradiographie.
HAUT DE PAGE4.3 Échec d’identification de la nature chimique du composé radiomarqué
La validité des données autoradiographiques nécessite de déterminer sous quelles formes (composé radiomarqué original, métabolites, radio-isotope libre, fragment radioactif du composé initial) est présente la radioactivité dans le tissu. La position du radionucléide sur la molécule (position de marquage) requiert une attention particulière. Le moyen le plus communément utilisé consiste à administrer du ligand « froid » en excès 500 à 1 000 fois la quantité du ligand radiomarqué. Une diminution du taux de fixation est considérée comme une évidence que la liaison est spécifique et saturable, ce qui exclut l’hypothèse de la fixation de la forme libre du radio-isotope, ou d’un fragment radiomarqué. Néanmoins, cette approche ne permet pas de lever le doute si la radioactivité enregistrée est liée au composé ou à ses métabolites marqués. Par conséquent, des études supplémentaires soit par compétition utilisant des métabolites sélectionnés, soit par comparaison...
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BIBLIOGRAPHIE
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(2) - FOOS (J.) - Manuel de radioactivité à l'usage des utilisateurs - . 197 p., Ed. Formascience, Orsay, 1993.
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(3) - COURRIÈRE (Ph) - Biophysique sensorielle ; Biophysique de la matière ; Physique nucléaire - . Tome II. Masson, Paris, 1990.
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(4) - CHERVU (L.R.), MURTY (D.R.) - Radiolabeling of antigens : procedures and assessment of properties (Radiomarquage d'antigènes : procédures et vérification des propriétés) - . Semin. Nucl. Med. 5, 2, p.157-72, 1975.
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DANS NOS BASES DOCUMENTAIRES
ANNEXES
Livres et revues
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BARBIER (Y.) - Les immunodosages de la théorie à la pratique - . 253 p. Éditions de l'ACOMEN, Paris, 1989.
SIMONET (G.) - Les radioisotopes en recherche et radioprotection - . 179 p. Masson, Paris, 1994.
Revue de l'ACOMEN - Spécial radioimmunologie : intérêt clinique, méthodologie, économique - . 172 p. 2, Éditions de l'ACOMEN, Paris, 1995.
Revue de l'ACOMEN - Rencontre ACOMEN de radioanalyse de Vars. Mars. 1998 - . 275 p. 3, Éditions de l'ACOMEN, Paris, 1998.
INGRAND (J.) - Numéro centré sur la R.I.A - . J. Med. Nucl. Biophy. 1, 15, p.1-113, 1991.
STUMPF (W.E.) - SOLOMON (H.F.) - Autoradiography and correlative imaging - . 597 p, Academic Press London, 1995.
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