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RÉSUMÉ
L’autoradiographie permet d'étudier l’exacte localisation d’une substance radiomarquée dans un tissu à des niveaux cellulaire et subcellulaire avec la conservation de l’architecture tissulaire. Cet article présente les différentes techniques d'autoradiographie : sur film et micro-autoradiographie. Une deuxième partie est consacrée au traitement des artefacts, qu'ils soient liés aux conditions expérimentales, à la préparation des tissus, ou à l'évaluation quantitative.
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Lire l’articleAuteur(s)
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François BOURREL : Docteur en pharmacie - Diplômé de l’Institut national des sciences et techniques nucléaires - du Commissariat à l’énergie atomique (INSTN-CEA) - Attaché des Hôpitaux de Toulouse
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Philippe COURRIÈRE : Professeur de biophysique, UFR de pharmacie, Toulouse - Biologiste des centres de luttes contre le cancer
INTRODUCTION
L’autoradiographie est une technique de grande qualité pour étudier l’exacte localisation d’une substance radiomarquée dans un tissu à des niveaux cellulaire et subcellulaire avec la conservation de l’architecture tissulaire. De plus, des quantifications absolues ou relatives de la substance marquée peuvent être obtenues. Cependant, l’autoradiographie est aussi quelquefois une technique d’interprétation compliquée et l’association de techniques immunohistochimiques et fluorométrique peuvent palier ces problèmes. Les principales améliorations portées à l’autoradiographie consistent à réduire l’acquisition du signal radioactif par l’utilisation d’imageurs permettant des gains de temps considérables et une analyse de l’image.
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3. Micro-autoradiographie
3.1 Objectif
La micro-autoradiographie permet la visualisation au niveau de la microscopie optique et de la microscopie électronique des grains d’argent ou des traces développées dans l’émulsion par les radiations ionisantes émises par le radioligand incorporé dans le tissu (localisation des récepteurs, radio-immunocytochimie).
HAUT DE PAGE3.2 Principe
L’échantillon peut être soit monté sur une lame et plongé dans un banc contenant l’émulsion autoradiographique liquide, soit directement monté sur une lame préimprégnée d’une émulsion, soit directement déposé sur un film photosensible. Cette méthode permet un contact intime entre l’échantillon et l’émulsion. L’on peut faire varier, avec la température du bain, l’épaisseur de la couche d’émulsion de façon à optimiser la résolution et la sensibilité. La lame est ensuite séchée très doucement et placée dans une cassette. Le dépôt d’une couche uniforme d’émulsion requiert répétabilité et pratique. L’image est développée et fixée après exposition.
L’ensemble de ces opérations doivent être standardisées avec rigueur et réalisées dans une chambre noire.
On ne peut pas utiliser de scintillateur pour réduire le temps d’exposition lors de la micro-autoradiographie en raison du manque de reproductibilité et des artefacts causés par le liquide scintillant.
3.3 Composition des émulsions par rapport à la macro-autoradiographie
Dans les émulsions utilisées en micro-autoradiographie :
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les cristaux d’halogénure d’argent sont plus petits et plus réguliers (forme et taille) ;
-
la sensibilité à la lumière est faible ;
-
le rapport argent / gélatine est beaucoup plus élevé ;
-
le bruit de fond est très faible ;
-
l’émulsion est fournie par le fabricant sous forme solide et nécessite d’être liquéfiée par reconstitution...
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Micro-autoradiographie
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BIBLIOGRAPHIE
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(2) - FOOS (J.) - Manuel de radioactivité à l'usage des utilisateurs - . 197 p., Ed. Formascience, Orsay, 1993.
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DANS NOS BASES DOCUMENTAIRES
ANNEXES
Livres et revues
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SIMONET (G.) - Les radioisotopes en recherche et radioprotection - . 179 p. Masson, Paris, 1994.
Revue de l'ACOMEN - Spécial radioimmunologie : intérêt clinique, méthodologie, économique - . 172 p. 2, Éditions de l'ACOMEN, Paris, 1995.
Revue de l'ACOMEN - Rencontre ACOMEN de radioanalyse de Vars. Mars. 1998 - . 275 p. 3, Éditions de l'ACOMEN, Paris, 1998.
INGRAND (J.) - Numéro centré sur la R.I.A - . J. Med. Nucl. Biophy. 1, 15, p.1-113, 1991.
STUMPF (W.E.) - SOLOMON (H.F.) - Autoradiography and correlative imaging - . 597 p, Academic Press London, 1995.
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