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Microscopie de fluorescence biomédicaleArticle de référence | Réf : E4327 v1
Auteur(s) : Claire LEFORT
Date de publication : 10 oct. 2020
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La microscopie optique est une technique de caractérisation très largement utilisée dans de nombreux domaines des sciences de la vie. La technique linéaire est parfaitement maîtrisée depuis de nombreuses années et fait office de standard de référence. La microscopie multiphotonique (MMP) est aussi une méthode de caractérisation connue des biologistes de tous horizons. De nombreuses plateformes d’imagerie, partagées entre plusieurs utilisateurs, se sont équipées de microscopes multiphotoniques durant les 20 dernières années. Le constat fait aujourd’hui par plusieurs responsables de ces plateformes est que cet outil particulièrement cher est peu utilisé, contrairement à d’autres systèmes comme les microscopes de fluorescence plein champ ou les microscopes confocaux. Pourtant, il est évident que le microscope multiphotonique apporte des éléments de caractérisation supplémentaires, inaccessibles par d’autres méthodes, comme l’imagerie 3D ou le multiplexage de l’excitation. Mais la complexité de l’utilisation, en particulier liée à la source laser, est l’un des critères responsables de ce manque de notoriété. Une simplification de la source d’excitation et une réduction de son coût semblent donc indispensables pour permettre à la microscopie multiphotonique d’être adopté à sa juste valeur comme outil de routine par les scientifiques pour qui cette méthode a été développée. La communauté des laseristes semble avoir conscience de ce besoin, car elle a déjà proposé depuis plusieurs années de très nombreuses solutions lasers spécialement fabriquées pour y répondre. Cependant, aucune de ces sources ne répond à tous les critères du besoin technique en source pour la MMP : impulsion femtoseconde, dans le proche infrarouge, à largeur spectrale de plusieurs centaines de nanomètres, avec une cadence de répétition d’une dizaine de MHz avec une puissance moyenne élevée. Plusieurs techniques lasers sont aujourd’hui en cours de développement pour générer un tel idéal [E 6 515]...
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(1) - MERTZ (J.) - Introduction to Optical Microscopy. - Roberts & Company Publishers (2009).
(2) - HELL (S.W.) - The 2015 super-resolution microscopy roadmap. - Journal of Physics D: Applied Physics, 48, 443001 (2015).
(3) - DIASPRO (A.) - Confocal and Two-photon microscopy, Foundations, applications and advances. - Wiley-Liss Inc., New York (2002).
(4) - LAKOWICZ (J. R.) - Principles of Fluorescence Spectroscopy. - 3rd edn, Berlin : Springer (2006).
(5) - DENK (W.), STRICKLER (J. H.), WEBB (W. W.) - Two-photon laser scanning fluorescence microscopy. - Science, 248, 73-6 (1990).
(6) - SHEPPARD (C.), KOMPFNER (R.) - Resonant scanning optical microscope. - Applied Optics, 17, 2879-2882 (1978).
On peut retrouver les spectres d’absorption linéaire des fluorophores les plus classiques en suivant l’un des liens ci-dessous :
Thermo Fisher Scientific : http://www.thermofisher.com › home › labeling-chemistry
Bio-Rad : https://www.bio-rad-antibodies.com/spectraviewer.html
On peut retrouver quelques spectres d’absorption biphotonique en suivant le lien : https://www.drbio.cornell.edu/cross_sections.html
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3 - PRÉ-REQUIS TECHNIQUES EN MICROSCOPIE DE FLUORESCENCE
4 - SOURCES LASERS DÉVELOPPÉES POUR LA MMP
5 - CONCLUSION
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