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RÉSUMÉ
La radioactivité offre des possibilités de suivre des éléments en très faible concentration. La radio-immunologie reste la mesure de référence de l’infiniment petit en biologie. Cet article présente les techniques de radio-immunologie, du dosage des substances à la détection du signal radioactif. Cette méthode est en constante évolution, pour améliorer sa simplicité, sa détectabilité et sa rapidité, notamment par une automatisation croissante.
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Lire l’articleAuteur(s)
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François BOURREL : Docteur en pharmacie - Diplômé de l’Institut national des sciences et techniques nucléaires - du Commissariat à l’énergie atomique (INSTN-CEA) - Attaché des Hôpitaux de Toulouse
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Philippe COURRIÈRE : Professeur de biophysique, UFR de pharmacie, Toulouse - Biologiste des centres de luttes contre le cancer
INTRODUCTION
Les radio-isotopes ont révolutionné la biologie médicale. La radio-immunologie reste la mesure de référence de l’infiniment petit en biologie. Des efforts constants ont été réalisés pour améliorer la simplicité, la détectabilité et la rapidité (par une automatisation croissante) de la méthode.
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1. Présentation générale
Soit à doser une substance S (une hormone H, par exemple), dans un échantillon d’un milieu biologique donné (sérum) ; le choix de la meilleure méthode de dosage à mettre en œuvre devra répondre à quatre impératifs :
-
sa limite de détection ou détectabilité doit être la plus basse possible ; en effet, la concentration de S dans le milieu étant généralement très faible, de l’ordre de la picomole (10 –12 mole), la méthode choisie doit avoir une limite de détection suffisante, tout en restant fiable (par exemple, valeurs normales des hormones thyroïdiennes : [FT4] 10 à 25 pmol.L –1 ; [FT3] 4 à 8 pmol.L–1) ;
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elle doit être spécifique ; un milieu biologique est toujours extrêmement complexe et la technique mise en œuvre doit doser de façon spécifique la substance S seule et non tout autre composé présent dans le sérum (par exemple, problème des réactions croisées en immunoanalyse lors du dosage de la TSH (thyroïd stimulating hormone), FSH (follicle stimulating hormone), LH (luteinizing hormone), HCG (hormone gonochorionique humaine). Ces hormones possèdent des chaînes structurales communes. L’indice d’Abraham permet de caractériser les réactions croisées lors du dosage d’un analyte) ;
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elle doit être reproductible ; sur un plan moins fondamental, la méthode choisie doit pouvoir être utilisée en routine, sur un nombre important d’échantillons, sans nuire à sa qualité ;
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sur un plan moins fondamental, elle doit, bien sûr, être la plus simple et la moins chère possible (automatisation).
1.1 Intérêt du marquage d’une substance
Soit dans une prise d’essai de volume V, connu, d’un milieu biologique (sérum), une masse très faible m x d’une substance S à doser.
Dans les techniques analytiques classiques, on commence toujours par extraire quantitativement de l’échantillon, une masse connue m e de substance pure ; compte tenu du rendement d’extraction k, déterminé simultanément (ou dans les mêmes conditions) grâce à un étalon interne :
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