Conclusion
Chromatographie planaire. Partie 2

P1474 v1 Article de référence

Conclusion
Chromatographie planaire. Partie 2

Auteur(s) : Antoine Michel SIOUFFI, Chantal DAUPHIN, Dominique PRADEAU

Relu et validé le 01 nov. 2022 | Read in English

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Sommaire
Médias

Présentation

1 - Détection visuelle

2 - Analyse quantitative par densitométrie

2.1 - Considérations théoriques
2.2 - Instrumentation
2.3 - Mise en œuvre de la mesure densitométrique
2.4 - Paramètres du signal
2.5 - Détection par ionisation de flamme

Tableau 1
2.6 - Mesures de solutés radioactifs
2.7 - Analyse d’image : vidéodensitométrie
2.8 - Couplages avec la spectroscopie

3 - Formation de dérivés pré- ou postchromatographie

4 - Courbes de calibrage

5 - Conclusion

Bibliographie & annexes

Présentation

RÉSUMÉ

La chromatographie planaire se distingue nettement de la chromatographie classique, et plusieurs types de détection sont possibles : en discontinu, en continu. Les méthodes d'analyse qui en découlent sont soit qualitatives (détection visuelle) soit quantitatives (densitométrie). Dans cette dernière configuration, la plaque chromatographique peut être alors considérée comme une colonne plate à usage unique. Après grattage de la zone où la substance a été localisée, la phase stationnaire est séparée du soluté et soumis à une technique de spectrométrie (infrarouge, de masse...).

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Auteur(s)

Antoine Michel SIOUFFI : Docteur ès sciences - Professeur émérite à l’Université Paul Cézanne, Aix Marseille III
Chantal DAUPHIN : Docteur ès sciences pharmaceutiques - Maître de conférences à l’université Paris XI
Dominique PRADEAU : Docteur ès sciences pharmaceutiques - Pharmacien responsable de l’Établissement pharmaceutique des Hôpitaux de Paris

INTRODUCTION

En chromatographie planaire classique, la détection des substances est une opération distincte de la chromatographie et elle s’effectue sur une couche débarrassée du solvant de développement : c’est une détection en discontinu. En chromatographie planaire à flux forcé, on peut procéder de la même façon, mais il est également possible de réaliser une détection en continu au moyen d’un détecteur semblable à ceux utilisés en CLHP. En détection en discontinu, la méthode générale consiste à comparer les régions de la couche où il n’y a pas d’échantillon aux régions dans lesquelles l’échantillon est présent. Lorsque suffisamment de substance peut être récupérée pour procéder à une identification par une méthode spectrale, la plaque est grattée à l’endroit où la substance a été localisée, la phase stationnaire est séparée du soluté et il ne reste plus qu’à réaliser la spectrométrie (infrarouge, de masse, etc.). Nous allons comparer qualitativement et quantitativement les différentes méthodes d’analyse.

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DOI (Digital Object Identifier)

https://doi.org/10.51257/a-v1-p1474

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5. Conclusion

De nos jours de nombreuses étapes restent à franchir, mais les grands axes sont d’ores et déjà ébauchés.

Dépôt : l’automatisation totale de cette étape, incluant une éventuelle préparation de l’échantillon (pesée, extraction…) est en voie d’être achevée.

Phases adsorbantes : de nombreux efforts concernant la compatibilité avec les phases éluantes, la structure du milieu poreux, la présence d’additifs dans la couche adsorbante sont encore à faire. Il ne fait pas de doute que de nouvelles technologies vont permettre l’apparition sur le marché de générations originales de plaques : des couches plus fines en sont une des approches les plus réalistes.

Développement : l’analyse multicouche ( multi-layer) en flux forcé offre les perspectives de développement les plus intéressantes.

Formation de dérivés : l’ère de la révélation à visée qualitative ( spray) commence à laisser le pas à de nouveaux procédés de dérivation offrant des caractéristiques se prêtant à l’analyse quantitative et permettant l’utilisation de nouveaux réactifs.

Détection : la compatibilité à de nombreuses méthodes de couplage, les procédés originaux comme l’analyse d’images sont autant d’atouts supplémentaires pour l’analyste, qui s’ajoutent aux avantages considérables de la CP. L’analyste dispose du chromatogramme sur la plaque et il peut utiliser de multiples procédés de détection. En particulier, il peut retraiter les solutés, c’est-à-dire changer de méthode de détection (UV → fluorescence par exemple). Il s’agit là (avec la possibilité d’analyse simultanée de plusieurs échantillons) de l’atout majeur de la CP, car aucune autre technique chromatographique ne le permet.

Ainsi, bien plus qu’une méthode concurrente des autres techniques chromatographiques, la chromatographie planaire doit être considérée comme une méthode à part entière, complémentaire aux autres. De l’avantage d’une méthode en discontinu ( off-line) offrant un grand nombre d’alternatives, elle évolue également vers une...

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