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RÉSUMÉ
La chromatographie planaire se distingue nettement de la chromatographie classique, et plusieurs types de détection sont possibles : en discontinu, en continu. Les méthodes d'analyse qui en découlent sont soit qualitatives (détection visuelle) soit quantitatives (densitométrie). Dans cette dernière configuration, la plaque chromatographique peut être alors considérée comme une colonne plate à usage unique. Après grattage de la zone où la substance a été localisée, la phase stationnaire est séparée du soluté et soumis à une technique de spectrométrie (infrarouge, de masse...).
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Lire l’articleAuteur(s)
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Antoine Michel SIOUFFI : Docteur ès sciences - Professeur émérite à l’Université Paul Cézanne, Aix Marseille III
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Chantal DAUPHIN : Docteur ès sciences pharmaceutiques - Maître de conférences à l’université Paris XI
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Dominique PRADEAU : Docteur ès sciences pharmaceutiques - Pharmacien responsable de l’Établissement pharmaceutique des Hôpitaux de Paris
INTRODUCTION
En chromatographie planaire classique, la détection des substances est une opération distincte de la chromatographie et elle s’effectue sur une couche débarrassée du solvant de développement : c’est une détection en discontinu. En chromatographie planaire à flux forcé, on peut procéder de la même façon, mais il est également possible de réaliser une détection en continu au moyen d’un détecteur semblable à ceux utilisés en CLHP. En détection en discontinu, la méthode générale consiste à comparer les régions de la couche où il n’y a pas d’échantillon aux régions dans lesquelles l’échantillon est présent. Lorsque suffisamment de substance peut être récupérée pour procéder à une identification par une méthode spectrale, la plaque est grattée à l’endroit où la substance a été localisée, la phase stationnaire est séparée du soluté et il ne reste plus qu’à réaliser la spectrométrie (infrarouge, de masse, etc.). Nous allons comparer qualitativement et quantitativement les différentes méthodes d’analyse.
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Analyse quantitative par densitométrieArticle inclus dans l'offre
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1. Détection visuelle
Destinée à l’analyse qualitative, la détection visuelle est très pratiquée dans l’analyse de stupéfiants par exemple. Dans tous les cas, la plaque est éclairée par une source convenable :
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la lumière blanche permet de repérer les substances colorées ;
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la lumière ultraviolette permet de voir les substances fluorescentes lorsqu’elles sont éclairées à ces longueurs d’onde.
Pour faciliter la détection, les fabricants de plaques CCM mélangent un indicateur fluorescent à la couche d’adsorbant ; ce peut être un sel inorganique qui donne à la plaque une couleur jaune (acétate d’uranyle) ou vert jaune (silicate de zinc). Le plus employé est un sulfure mixte de zinc et de cadmium fluorescent à 254 nm d’où l’appellation F 254.
Les sels organiques sont fluorescents à 366 nm en général ; les plus employés sont le 5,8,10-trisulfonate de 3-hydroxypyrène (sel de sodium), la rhodamine B, la 2,7-dichlorofluorescéine et des dérivés du stilbène.
Dans le cas des phases greffées, un sel de tungstène et de sodium est utilisé. Les composés apparaissent sous forme de taches sombres sur fond lumineux : on observe une diminution de fluorescence mais pas une extinction. La pulvérisation d’un réactif sur la plaque s’apparente à la détection postchromatographique par formation de dérivés et sera traitée au paragraphe 3.
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BIBLIOGRAPHIE
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(3) - GUIOCHON (G.), GONNORD (M.F.), ZAKARIA (M.), BEAVER (L.), SIOUFFI (A.M.) - Chromatography with a two dimensional column - . Chromatographia, 17, 121-126 (1983).
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(4) - RIGHEZZA (M.), SIOUFFI (A.M.) - Planar chromatography with rectangular packed capillary columns and electrochemical detection - . J. Planar Chromatogr., 1, 293-298 (1988).
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(5) - RUOFF (A.L.), GIDDINGS (J.C.), STEWART (G.H.), SHIN (H.K.) - Diffusion of liquids in unsatured paper - . J. Planar Chromatogr., 3, 438-445 (1960).
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(6) - GUIOCHON (G.), SIOUFFI (A.M.) - Study of the performances of thin layer chromatography. III. Flow velocity of the mobile phase - ....
(liste non exhaustive)
HAUT DE PAGEMerck
Macherey Nagel3MWhatmanAnaltech HAUT DE PAGE1.2 Appareillages de chromatographie planaire
Camag
DesagaRadiomaticShimadzu HAUT DE PAGE
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