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Analyses en microbiologie - Produits non stérilesArticle de référence | Réf : P3353 v1
Auteur(s) : Pascale BOUTTIER-BÉCASSE, Pascale NABET, Corinne DANAN, Jean-Pierre MORÉTAIN, Jacques-Christian DARBORD
Date de publication : 10 juin 2006
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par Pascale NABET
La méthode la plus ancienne pour déterminer le titre d’un antibiotique est le titrage microbiologique. Le principe en est simple : il suffit de mesurer l’inhibition par l’antibiotique à doser de la croissance d’un micro-organisme sensible. Le titrage peut se faire avec un micro-organisme cultivé en milieu solide (il s’agit des titrages par diffusion) ou avec un micro-organisme cultivé en milieu liquide (il s’agit des titrages par turbidimétrie).
Le choix de la méthode de titrage dépend de la concentration d’antibiotique à mesurer, du milieu dans lequel se trouve l’antibiotique, du nombre d’analyses à effectuer et de la capacité d’automatisation du laboratoire.
Dosages par diffusion
La croissance microbienne a lieu en milieu solide. Le milieu gélosé en surfusion est ensemencé avec le micro-organisme test puis versé en couche uniforme dans une boîte de diffusion (généralement grande boîte de Petri de forme rectangulaire). Les solutions antibiotiques de référence et à tester sont déposées dans des cupules découpées dans la gélose ou dans des cylindres inox disposés sur la gélose ou encore sur des disques pour antibiogramme. Avant incubation, une prédiffusion à température ambiante est réalisée puis les boîtes sont mises à incuber pendant 18 h à 32 oC environ. Après incubation, les zones d’inhibition de la croissance microbienne sont mesurées. Elles sont proportionnelles aux concentrations mises en œuvre (figure 1) . Le titre de l’antibiotique à tester est calculé à l’aide de méthodes statistiques appropriées .
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(1) - * - Pharmacopée Européenne 2.7.2 Titrage microbiologique des antibiotiques.
(2) - * - USP <81> Antibiotics-Microbial assays.
(3) - * - Pharmacopée Européenne, 5.3 Analyse statistique des résultats des dosages et essais biologiques.
(4) - ANON - Detection and confirmation of inhibitors in milk and milk products - . Bulletin of the International Dairy Federation, 258, 2-81 (1991).
(5) - ANON - Détection des antibiotiques - Des méthodes adaptées à chaque étape de la filière - . Revue Laitière Française, 579, 21 (1998).
(6) - BOGAERTS (R.), WOLF (F.) - A standardized method for the detection of residues of antimicrobial substances in fresh meat - . Die Fleischwirtschat : 60, 667-675 (1980).
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