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Auteur(s)
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Jean MONTREUIL : Professeur émérite ; docteur ès sciences
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André VERBERT : Professeur ; docteur ès sciences - Laboratoire de chimie biologique - Unité mixte de recherche n o 111 CNRS , Université des sciences et technologies de Lille
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Lire l’articleINTRODUCTION
Les glucides, encore appelés sucres ou hydrates de carbone , représentent, avec les protéines, les lipides et les acides nucléiques, l’une des quatre grandes classes de constituants de la matière vivante. De tout temps, ils ont fait l’objet de recherches actives, principalement en raison de leur importance économique et, à cet égard, l’industrie des hauts glycopolymères comme l’amidon, la cellulose, les gommes et les pectines s’est développée dès le XIX e siècle. Mais, à cet intérêt économique, s’est rapidement ajouté un intérêt biologique dû, par exemple, au fait que le glucose et le glycogène sont, pour l’Homme, source d’énergie pour le premier et réserve d’énergie pour le second. Très tôt, une glycopathologie est née liée aux troubles de la régulation du métabolisme glucidique, comme dans le cas du diabète. Enfin, et plus récemment, la découverte que certains glucides complexes − ceux qui, en particulier, entrent dans la constitution des membranes cellulaires − sont porteurs de messages et jouent un rôle essentiel dans la vie sociale des cellules, a introduit les glucides dans le domaine de la biologie moléculaire. Ainsi est né au fil des ans le terme de glycotechnologie qui concerne l’ensemble des techniques susceptibles de produire des glucides d’intérêt économique dans les domaines de la santé et de l’agroalimentaire, en particulier.
Les glucides sont classés en glucides simples : les monosaccharides , et en produits de condensation de ces derniers : les glycosides .
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Méthodes de dosage des glucidesArticle inclus dans l'offre
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3. Procédés d’isolement des glucides libres et conjugués
Le « glyco-analyste » peut être confronté à deux cas de figures :
ou bien les glucides sont libres dans leur milieu naturel et, dans le cas particulier d’oligosaccharides, leur isolement sera réalisé en appliquant les procédés décrits dans le paragraphe 3.3 ;
ou bien ils sont conjugués et, dans le cas particulier des glycoprotéines, le seul auquel nous nous attacherons, leur étude nécessitera leur libération préalable par coupure de la liaison glycanne − protéine ou glycanne − peptide.
Se pose donc, en préalable, la question de l’isolement des glycoprotéines et des glycopeptides.
3.1 Isolement des glycoprotéines et des glycopeptides
3.1.1 Isolement des glycoprotéines
Les procédés généraux de fractionnement et de purification des protéines sont parfaitement applicables aux glycoprotéines. Les mécanismes d’action des différents agents de fractionnement utilisés sont toutefois dominés par l’influence des glycannes très hydrophiles par leurs fonctions hydroxylées et, plus encore, par leurs groupements ionisables des résidus sialylés, phosphorylés et sulfurylés qui solvatent la protéine.
La description détaillée des très nombreuses et très diverses méthodes qui sont utilisées est impossible à réaliser dans le cadre du présent article et nous nous limiterons à exposer le principe de quelques-unes d’entre elles, certaines (les méthodes de relargage), fondées sur les propriétés conjointes des glycannes et des protéines, d’autres (les méthodes de chromatographie d’immunoaffinité), sur celles des protéines elles-mêmes ou sur celles des glycannes...
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Procédés d’isolement des glucides libres et conjugués
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BIBLIOGRAPHIE
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(1) - CHAPLIN (M.F.), KENNEDY (J.F.) - Carbohydrate Analysis. A practical approach - , IRL Press, Oxford, 1994.
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(2) - DUMITRIU (S.) - Polysaccharides in Medicinal Applications - , Marcel Dekker, New York, 1996.
-
(3) - HOUNSELL (E.) - Glycoprotein analysis in Biomedicine. - In J. Walker (ed), Methods in molecular biology, Humana Press, Totowa (N.J.), 1993.
-
(4) - MONTREUIL (J.), VLIEGENTHART (J.F.G.), SCHACHTER (H.) - Glycoproteins - , Comprehensive Biochemistry, vol. 29a (1995) and vol. 29b (1997), Elsevier, Amsterdam.
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(5) - VERBERT (A.) - Methods on Glycoconjugates. - A Laboratory manual, Harwood Academic, Chur (CH), 1995.
-
(6) - WIEGANDT (H.) - Glycolipids. - In A. Neuberger and L.L.M. van Deenen, Comprehensive Biochemistry, vol. 10, pp. 1-188, Elsevier, Amsterdam, 1985.
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