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Électrophorèse capillaire - AppareillageArticle de référence | Réf : P3367 v1
Auteur(s) : Myriam TAVERNA, Isabelle LE POTIER, Philippe MORIN
Date de publication : 10 déc. 2003
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L’essor des biotechnologies et de la recherche sur la protéomique a contribué à mener, ces dernières années, un effort considérable pour développer de nouvelles stratégies analytiques performantes pour l’analyse des protéines et de leurs fragments. Pouvoir de résolution élevé, rapidité des analyses et utilisation de faibles quantités d’échantillon sont autant d’atouts qui ont placé l’électrophorèse capillaire comme alternative efficace aux techniques de chromatographie en phase liquide ou d’électrophorèse sur des supports classiquement employées dans ce domaine.
L’identification et le dosage des acides aminés contenus dans un mélange complexe comme, par exemple, un hydrolysat de peptides ou de protéines sont principalement effectués par les modes ECZ et CEM (cf. article Électrophorèse capillaire- Principe).
La détection spectrométrique UV est généralement utilisée mais, en raison du faible coefficient d’absorptivité molaire de la plupart des acides aminés, une réaction de dérivation par un groupement chromophore est souvent nécessaire afin d’abaisser la limite de détection. Les agents chromophores fréquemment utilisés sont le chlorure de 5-diméthylaminonaphtalène-1-sulfonyle qui permet d’obtenir les dérivés dansylés (DNS), le 9-fluorométhylchloroformate (FMOC), l’o-phtaldialdéhyde (OPA) ou encore le naphtalène-2,3-dicarboxaldéhyde (NDA).
L’augmentation de la sensibilité de détection peut également être obtenue en utilisant la détection par fluorescence induite par laser ou la détection électrochimique. Les groupements fluorophores les plus couramment utilisés pour la réaction de dérivation des acides aminés sont la fluorescéine isothiocyanate (FITC), la fluorescamine, l’OPA et le NDA, ces deux derniers agents permettant, en outre, de former des dérivés électroactifs. Une présentation plus exhaustive des agents de dérivation est présentée dans l’article Électrophorèse...
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TECHNIQUES D'ANALYSE
(1) - FRANÇOIS (C.), MORIN (Ph.), DREUX (M.) - Effect of the concentration of 18-crown-6-added to the electrolyte upon the separation of ammonium, alkali and alkali-earth cations by capillary electrophoresis - . J. Chromatogr. A, 706, p. 535-553 (1995).
(2) - MORIN (Ph.) - Améliorations récentes lors de l’analyse des ions par électrophorèse capillaire - . Analusis, 27, p. 107-120 (1999).
(3) - CAHOURS (X.), MORIN (Ph.), DREUX (M.) - Quantitative determination of inorganic minor cations in sodium-, calcium- and magnesium-matrix samples by capillary electrophoresis - . J. Chromatogr. A, 810, p. 209-220 (1998).
(4) - FRANÇOIS (C.), MORIN (Ph.), DREUX (M.) - Separation of transition metal cations by capillary electrophoresis : optimization of complexing agent concentrations (lactic acid and 18-crown-6) - . J. Chromatogr. A, 717, p. 393-408 (1995).
(5) - BAUMY (P.), MORIN (Ph.), DREUX (M.), VIAUD (M.), BOYE (S.), GUILLAUMET (G.) - Determination of β-cyclodextrin inclusion complex constants for 3,4-dihydro-2-H-1-benzopyran enantiomers by capillary electrophoresis - ....
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